SeCore SBT

SeCore SBT

Características Principais

• Os kits de tipagem HLA SeCore aliam a acurácia do sequenciamento bidirecional ao poder e flexibilidade do aperfeiçoado software de análise para garantir resultados em alta resolução.
• Sequenciamento bidirecional de alelos HLA de Classe I e Classe II.
• Perfil de ciclagem idêntico para todos os loci, reduz erros de manuseio de amostra e aumenta a eficiência.
• Menor tempo de amplificação e sequenciamento (90 minutos cada), significa que todo o processo de sequenciamento pode ser completado em um dia.
• Melhorias no Software uTYPE™ HLA para análise, interpretação e relatório de resultados mais eficientes, incluindo a opção de mostrar os grupos¹ P e G na tela de análise e nos relatórios.
• Identificação de alelos HLA de todos os loci e picos de análise balanceados para a identificação de heterozigotos.
• Amplo conjunto de GSSPs (Group Specific Sequencing Primers) para resolução de ambiguidades.

¹Função disponível apenas no uTYPE RUO e CE-IVD.

Visão Geral

O SeCore SBT utiliza o método de sequenciamento de Sanger para identificar alelos HLA de Classe I e Classe II (A, B, C, DRB1, DRB3,4,5, DQB1 e DPB1) a partir do DNA genômico. Os kits de sequenciamento de alta resolução são locus específicos e fornecem reagentes para amplificação, purificação e sequenciamento dos alelos HLA. Fragmentos desnaturados resultantes do sequenciamento são processados por eletroforese capilar em um analisador genético. Os arquivos gerados pelo analisador genético são importados no Software uTYPE HLA Sequence Analysis Software, que compara os dados gerados com a base de dados IMGT/HLA para determinar a tipagem molecular.

Princípio SeCore SBT

Os kits de tipagem SeCore HLA oferecem sequenciamento bidirecional de alelos HLA de Classe I e Classe II.

1. A reação de amplificação locus específica é completada em 90 minutos, utilizando a mistura contendo o mix de amplificação, Polimerase FastStart™ Taq DNA e amostra de DNA genômico. A cobertura dos exons está detalhada na Tabela 1 abaixo.
2. O produto amplificado é purificado com ExoSAP-IT® para eliminar primers e dNTPs não incorporados.
3. O sequenciamento em ciclos é finalizado em 90 minutos utilizando o kit de Sequenciamento BigDye Terminator v1.1 Cycle Sequencing Kit.
4. Os fragmentos de sequenciamento são purificados com precipitação em etanol e desnaturados utilizando Hi-Di™.
5. O produto desnaturado é detectado por eletroforese capilar em um analisador genético.
6. Os resultados são gerados no analisador genético na forma de arquivos ab1: o software de sequenciamento uTYPE HLA é utilizado para comparar os dados com a base de dados IMGT/HLA para determinar a tipagem molecular.

SeCore GSSP (RUO)

Os kits SeCore Primers de Sequenciamento Grupo Específico (Group Specific Sequencing Primer – GSSP) têm como alvo um haplótipo, permitindo ao usuário resolver ambiguidades de fase cis/trans em pares de alelos ambíguos.
Pares de alelos com ambiguidade cis/trans surgem da tipagem padrão Sanger por sequenciamento de bases. O GSSP se liga a apenas um dos dois alelos presentes na amostra de DNA permitindo a determinação da tipagem HLA final.

SeCore express SBT

Os kits Express são destinados para os laboratórios de HLA realizando ensaios com no mínimo 96 amostras por locus. Os kits estão disponíveis para os locus HLA A², B², C², DRB1³ e DQB1.

² Somente primers de sequenciamento e amplificação do Exon 2 + 3 estão disponíveis para os kits Express A, B, C.
³ Somente primers de sequenciamento e amplificação do Exon 2 estão disponíveis para os kits Express DRB1.
Obs.: kits express são kits designados para corrida de no mínimo 96 amostras.

SeCore SBT Cobertura dos Exons

 *SeCore B Locus contém primer unidirecional de sequenciamento para Exon 1 Forward (1F) apenas.
**Pode necessitar uma segunda reação de amplificação se todos os 14 primers bidirecionais de sequenciamento são utilizados.

Informações do Produto SeCore SBT (Para uso em diagnóstico in vitro. Registro ANVISA: 80298490138)

Informações do Produto SeCore Express SBT (Para uso em diagnóstico in vitro. Registro ANVISA: 80298490138)

² Somente primers de sequenciamento e amplificação do Exon 2 + 3 estão disponíveis para os kits Express A, B, C.
³ Somente primers de sequenciamento e amplificação do Exon 2 estão disponíveis para os kits Express DRB1.
Obs.: kits express são kits designados para corrida de no mínimo 96 amostras.

Tempo⁴ no fluxo de trabalho SeCore

⁴Fluxo de trabalho padrão estimado baseado no tempo necessário para processor 96 amostras
◊ Um tempo adicional de 50 a 450 minutos deve ser adicionado para a Eletroforese Capilar “Tempo no equipamento” dependendo do modelo do Analisador ABI utilizado. Consultar Tabela 6 abaixo.

Tempo⁵ no equipamento para eletroforese capilar por instrumento

⁵Eletroforese Capilar baseada no polímero POP-6™.