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Detecção de Anticorpos anti-SARS-CoV-2 na Resposta Vacinal

Como saber se a vacina está sendo eficaz?

O desenvolvimento de um ensaio confiável e efetivo é crucial para que se possa melhor compreender a epidemiologia da COVID-19.

Entender a natureza da resposta do anticorpo a esta infecção é a chave para avaliar a resposta imune humoral e a eficácia da resposta vacinal desenvolvida a curto, médio e longo prazo.

A organização genômica do SARS-CoV-2 codifica 4 grupos de proteínas estruturais:  spike, envelope, membrana e nucleocapsídeo. A maioria dos testes comerciais disponíveis têm como alvo a spike ou o nucleocapsídeo e o seu desempenho varia de acordo com a plataforma utilizada (ensaio imunoenzimático, quimioluminescência, métodos imunocromatográficos). A ocorrência de resultados falso negativos pode ocorrer pela não detecção de anticorpos contra as outras proteínas-alvo, enquanto as reações falso positivas ocorrem devido à presença de anticorpos contra outros coronavírus que causam os resfriados comuns, já circulantes em todo o mundo, inclusive no Brasil.

O Teste LABScreen™ COVID Plus foi desenvolvido em parceria com 4 importantes universidades: Stanford University, Emory University, University of Cincinnati e University Health Network. O desenvolvimento foi baseado na plataforma Luminex, um método de citometria modificado que é extremamente confiável e 50 vezes mais sensível que um ensaio ELISA. O sistema Luminex é considerado como padrão ouro na detecção de anticorpos anti-HLA na área de transplantes e amplamente utilizado no Brasil.

Esta experiência acumulada de mais de 25 anos permitiu que os pesquisadores envolvidos neste processo, juntamente com a One Lambda, desenvolvessem um produto com segurança e confiança.

O kit LABScreen COVID Plus apresenta 98,6% de especificidade e 100% de sensibilidade através de uma avaliação semiquantitativa.

Isso significa que é possível avaliar a presença de anticorpos após a infecção pelo coronavírus, identificar quais coronavírus o paciente já teve contato (SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS-CoV, NL63, 229E, HKU1 e OC43), além de identificar a classe de Imunoglobulina envolvida e até mesmo a força de ligação desse anticorpo. Com este ensaio multiplex é possível processar até 96 amostras simultaneamente em 2-3 horas.

O kit é capaz de detectar a presença de anticorpos contra os alvos: spike total, subunidades spike S1 e S2, RBD (Receptor-Binding Domain) e nucleocapsídeo, possibilitando identificar anticorpos responsivos ao vírus completo ou proteínas superficiais. Desta forma, temos a abordagem completa para caracterização do perfil de anticorpos do paciente e a resposta imune à COVID-19.  Podemos distinguir tanto a imunidade quanto a durabilidade da resposta vacinal (determinar taxas de eficácia).

Nas imagens a seguir, podemos identificar 3 situações:

Caso 1. Paciente com teste positivo para os 5 alvos.
Caso 2. Paciente positivo para Spike, S1 e RBD, mas negativo para S2 e Nucleocapsídeo.
Caso 3. Paciente com teste negativo para os 5 alvos.

Devido às particularidades imunológicas que ainda estão sendo estudadas a respeito do SARS-CoV-2, a resposta vacinal ainda é uma incógnita. Não se sabe ao certo se haverá a produção de anticorpos neutralizantes e nem por quanto tempo permanecerão circulantes. Estudos futuros poderão correlacionar os gráficos obtidos (Índice Médio de Fluorescência) nesse teste e títulos de soro neutralização.

O exemplo abaixo é de uma paciente que apresentou RT-qPCR positiva no dia 03/07/20. O resultado de RT-qPCR foi negativo no dia 15/07/20, e no dia 23/12/20 o soro coletado para a realização do Teste LABScreen COVID Plus.  Foi observada ausência total de anticorpos anti-SARS-CoV-2, mas houve reações positivas para outros coronavírus. 

Por se tratar de um novo vírus que apresenta alto potencial de mutação (cerca de 7 mutações já descritas), a eficácia das vacinas tende a ser diferente entre as populações. Sendo assim, é fundamental avaliar a resposta vacinal e seus aspectos, como: capacidade de respostas para diferentes proteínas virais, força de ligação dos anticorpos e o tempo que eles permanecerão circulantes. Levando em conta a escassez de vacinas disponíveis no mercado neste momento, outro ponto de avaliação importante seria a vacinação em indivíduos que já possuem anticorpos circulantes, em decorrência de exposição ao novo coronavírus.  

Os resultados obtidos com o Kit LABScreen COVID Plus podem ser utilizados como ferramentas de orientação diagnóstica e vacinal para SARS-CoV-2, permitindo desenhar protocolos considerando o perfil de cada paciente.  

Para indivíduos que não respondem à imunização, por exemplo, seria possível avaliar o uso de vacinas com mecanismo imunizante diferente do anterior.

Em pacientes com histórico de infecção prévia, seria possível avaliar a susceptibilidade à reinfecção pelo fato de não apresentar anticorpos específicos.

Protocolos de estudo devem ser implementados para poder avaliar a eficácia pós vacinal em diferentes indivíduos. Esses estudos podem servir como ferramenta importante para entender melhor alguns pontos que ainda precisam ser esclarecidos a respeito da imunização contra o SARS-CoV-2, seja por meio de vacinação, seja por infecção:

  • Como ocorrem os mecanismos de resposta imune em casos assintomáticos, leves, moderados ou graves
  • A duração da multiplicação viral em pacientes assintomáticos versus sintomáticos
  • Comparação do nível de imunidade humoral observada em casos assintomáticos ou leves com maiores níveis observados nas formas moderada ou grave
  • Por quanto tempo os anticorpos permanecem em indivíduos com diferentes níveis de resposta (assintomáticos, forma leve, moderada ou grave)
  • O papel dos Genes HLA nos diferentes padrões de resposta à infecção. Atualmente, está em andamento no mundo todo o Consórcio HLA/COVID-19. Os dados serão apresentados no 18º International HLA and Immunogenetics Workshop em maio de 2022, em Glasgow
  • Detecção de anticorpos neutralizantes
  • Propriedades biológicas e imunológicas de novas variantes
  • Necessidade de doses de reforço
  • Entre outros aspectos.

Referências Bibliográficas:
  • Bray RA, Lee JH, Brescia P, Kumar D, Nong T, Shih R, Woodle ES, Maltzman JS, Gebel HM. Development and Validation of a Multiplex, Bead-Based Assay to Detect Antibodies Directed Against SARS-CoV-2 Proteins. Transplantation. 2020 Dec 2. doi: 10.1097/TP.0000000000003524. Epub ahead of print. PMID: 33273320.
  • Cravedi, P, Mothi, SS, Azzi, Y, et al for the TANGO study group. COVID-19 and kidney transplantation: Results from the TANGO International Transplant Consortium. Am J Transplant. 2020 20: 3140– 3148. https://doi.org/10.1111/ajt.16185.
  • EUA, Product Insert. LA, 2021.
  • https://pebmed.com.br/Os longos passos na corrida vacinal contra a covid 19/
  • Locke JE, Zachary AA, Warren DS, et al. (2009) Proinflammatory events are associated with significant increases in breadth and strength of HLA-specific antibody. Am J Transplant. 9(9):2136-2139. doi:10.1111/j.1600-6143.2009.02764.