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Historicamente, o método estabelecido para a determinação de antígenos HLA tem sido o teste de linfocitotoxicidade1. Entretanto, com o advento das tecnologias de PCR, técnicas de tipagem baseadas em DNA tornaram-se rotineiras em laboratório.
Para a maioria dessas metodologias, o processo de PCR é usado apenas como uma etapa de amplificação para adquirir o DNA alvo necessário. O processo de tipagem HLA requer um passo de pós-amplificação para discriminar os diferentes alelos (por exemplo, RFLP, SSOP, dot blot reverso).
Diferentemente de outros métodos baseados em PCR, a metodologia SSP empregada no teste Micro SSP ™ da One Lambda discrimina os diferentes alelos durante o processo de PCR2. Isso reduz o tempo de processamento pós-amplificação para uma simples etapa de detecção por eletroforese em gel. Em contraste com a escala de reação à linfocitotoxicidade (1 = negativo a 8 = positivo), os resultados do teste Micro SSP ™ são positivos ou negativos. Isso elimina a necessidade de interpretação complicada dos resultados.
Além disso, alterações de nucleotídeo único podem ser discriminatórias em PCR-SSP, enquanto grupos de reação cruzada (CREGs) fornecem grandes desafios para a tipagem sorológica3. Finalmente, devido à natureza sintética dos reagentes de tipagem de DNA (por exemplo, primers oligonucleotídicos), a estabilidade foi bastante melhorada e a variação de lote para lote foi reduzida.
A metodologia de PCR-SSP baseia-se no princípio de que numa reação com Taq polimerase recombinante, os primers de oligonucleotídeos com correspondência completa são utilizados de forma mais eficaz na amplificação de uma sequência alvo do que um primer sem essa correspondência.
Os pares de primers são projetados para ter combinações perfeitas apenas com um único alelo ou grupo de alelos. Sob condições estritamente controladas de PCR, pares de primers perfeitamente combinados resultam na amplificação de sequências alvo (isto é, um resultado positivo) enquanto pares de primers desemparelhados não resultam em amplificação (isto é, um resultado negativo). Após o processo de PCR, os fragmentos de DNA amplificados são separados por eletroforese em gel de agarose e visualizados por coloração com brometo de etídio e exposição à luz ultravioleta.
A interpretação dos resultados da PCR-SSP é baseada na presença ou ausência de um fragmento específico de DNA amplificado. Uma vez que a amplificação durante a reação de PCR pode ser adversamente afetada por vários fatores (erros de pipetagem, baixa qualidade do DNA, presença de inibidores, etc.), um par de primers de controle interno é incluído em cada reação de PCR. O par de primers de controle amplifica uma região conservada do gene da β-globina humana, que está presente em todas as amostras de DNA humano e é usada para verificar a integridade da reação de PCR. Na presença de uma banda de tipagem positiva (amplificação específica de um alelo HLA), a banda do controle interno pode ser fraca ou ausente devido às diferenças de concentração e temperaturas de fusão entre os pares de primers específicos HLA e os de controle interno.
| Código | Teste | Classe | Apresentação |
| SSPABDR | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe I e II | 10 testes |
| SSP1C | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe I | 16 testes |
| SSP2L | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe II | 30 testes |
| SSPSB5 | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe I | 24 testes |
| SSP1A | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe I | 12 testes |
| SSP2LB | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe II | 40 testes |
| SSP1B | Teste de Tipagem HLA por DNA Micro SSP Genérico (baixa e média resolução) | Classe I | 8 testes |